背景:

   內(nèi)切糖苷酶 F3（Endo F3）可在寡糖N-連接的二乙?；鶜ざ蔷厶呛诵闹械膬蓚€N-乙酰葡糖胺殘基之間進行切割，從而產(chǎn)生截短的糖分子，其中一個N-乙酰氨基葡萄糖殘基則保留在天冬酰胺上。Endo F3對寡甘露糖和雜合分子沒有活性。Endo F3可以較慢的速率切割非巖藻糖基化的雙角和三角復合寡糖，但僅限于肽連接的寡糖。雙角結(jié)構(gòu)的核心巖藻糖基化可使其活性增加至400倍。核心巖藻糖基雙角結(jié)構(gòu)是Endo F3的有效底物，即使在游離的低聚糖中也是如此。Endo F3還可在游離和蛋白質(zhì)連接的寡糖上對巖藻糖基化的三甘露糖核心結(jié)構(gòu)進行切割。復合四角聚糖的天然去糖基化需要通過順序水解為三甘氨酸二乙?；鶜ざ牵∕an3GlcNAc2）核心，然后再使用Endo F3進行切割。

   Rhinogen^? Endo F3重組表達于E. coli，N端帶MBP融合蛋白，C端帶6×His標簽。Rhinogen^? Endo F3 切割游離的或天冬酰胺連接的三觸角或 α-(1-6) 巖藻糖基化的雙觸角寡糖，以及三氨糖基殼二糖核心結(jié)構(gòu)。非巖藻糖基化的雙觸角聚糖也會被切割，但速度會降低 40 倍。它在寡糖的二乙酰殼二糖核心中的兩個 N-乙酰氨基葡糖殘基之間裂解，產(chǎn)生一個截短的糖分子，其中一個 N-乙酰氨基葡糖殘基留在天冬酰胺上。相反，PNGaseF 可完整去除寡糖。α1-3 巖藻糖基化會抑制酶活性，且對寡甘露糖和雜合分子沒有活性。

產(chǎn)品規(guī)格：

   Rhinogen^? 內(nèi)切糖苷酶 F3（Endo F3）包裝規(guī)格如下：

配套試劑：

   Rhinogen^? 內(nèi)切糖苷酶 F3（Endo F3）配套提供的試劑如下：

   Endo F3重組表達于E. coli，理論分子量約74 kDa，N端帶MBP融合蛋白，C端帶6×His標簽。

產(chǎn)品質(zhì)量:

   1. 高純度：通過SDS-PAGE檢測，純度≥90％；

   2. 高活性：活性＞5U/ml；

酶活定義:

   在 37?C、pH 4.5 條件下，在 1 分鐘內(nèi)催化 1 μM豬纖維蛋白原釋放 N-連接寡糖所需的酶量。

應(yīng)用:

   1. 糖組學；

   2. 糖型分析及糖基化位點的確定；

   3. 蛋白質(zhì)組學；

保存條件：

   采用冰袋運輸，2-8℃可儲存12個月。避免反復凍融。

使用注意事項：

   1. 對于不同的糖蛋白樣品，需要實驗摸索最適的酶濃度及反應(yīng)時間。

   2. 反應(yīng)體系可以線性擴大。

   3. 為防止微生物污染，盡可能無菌取用。

   4. 較高的酶濃度可以提高單個糖蛋白的消化效率，需要根據(jù)實際情況優(yōu)化。

   5. 適當分裝以減少多次凍融帶來的活性損失。

   6. 本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人或動的物診斷及治療用途。